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 作者：张道权，吴正祥，吴强 ，杨枫，吴正升
【摘要】  目的 考察口服硫酸亚铁（FeSO4 ）对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠氧化应激状态 的影响。方法 采用TNBS乙醇溶液复制UC大鼠模型，雄性SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、FeSO 4对照组（100 mg·kg-1·d-1）和FeSO4 低剂量组（50 mg ·kg-1·d-1）、中剂量组（100 mg · kg-1·d-1 ）和高剂量组（300 mg · kg -1·d-1），给药2周后分别观察大鼠的一般状态、组织病理学变化、组织及血清超氧化物歧化酶（SOD）与丙二醛（MDA）水平。 结果 FeSO4 中、高剂量组大鼠体质量减轻，腹泻动物数增加，结肠组织损伤加重，血清与结肠组织SOD活性降低、MDA水平升高（P<0.05）。结论 UC模型大鼠体内存在氧化应激，口服补充FeSO4 可能会进一步加剧其体内氧化应激状态及结肠组织病理学损伤。
【关键词】  硫酸亚铁;溃疡性结肠炎;三硝基苯磺酸;氧化应激;大鼠
　　溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种病因  不明的直肠和结肠慢性非特异性炎症，临床主要表现为反复发作的腹痛、腹泻及黏液脓血便，重症或病情持  续活动的患者可出现缺铁性贫血。临床观察发现，给予UC患者口服铁剂不能很好地被耐受，甚至会加重  胃肠道症状或促进疾病活动［1］。硫酸亚铁（ferrous   sulfate，FeSO 4 ）是临床最为常用的铁剂之一，同时也是一种强氧化剂，可能会因产生自由基（oxygen-derived   free radicals，OFR）而加重组织损伤［2］。本实验利用三  硝基苯磺酸（2，4，6- trinitrobenzene sulfonic acid，TN-  BS）复制UC模型，观察FeSO4对UC模型大鼠氧化应激状态的影响，为临床治疗提供依据。
　　1 材料和方法  
　　1.1 药物和试剂
　　TNBS购于Sigma公司，5%（W/V）水溶液，批号为P2297;FeSO4，上海黄浦制药有限责任公司生产，批号为050606，轻轻把FeSO4片研碎，称取一定量的粉末，加入蒸馏水配成100 mg · ml    -1的混悬液备用;丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、考马斯亮兰蛋白  检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品，批号为20060323。  
　　1.2 动物
　　雄性SD大鼠60只，体质量200～220 g，由安徽医科大学实验动物中心提供，普通级。 
　　1.3 仪器
　　756MC紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限  公司），TGL-16H高速离心机（珠海黑马医学仪器有限公司），可控式硅恒温水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司），QL-901漩涡混合器（江苏海门麒麟医用仪表厂），电子分析天平（上海天平仪器厂），DIAX-900内切式组织匀浆机（德国Heidolph公司）。
　　 1.4 大鼠UC模型制备［3］
　　健康大鼠60只，随机分为6组。留2组作正常对照组与FeSO    4 对照组，余4组均制备模型，禁食不禁水24 h后，腹腔注射3%戊巴比妥钠（1 ml·kg-1）使大鼠轻微麻醉后，将直径2 mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约8 cm处，将TNBS（125 mg·kg    -1）的50%乙醇溶液缓缓注入到大鼠肠腔内，提起大鼠尾部，倒置30 s，使造模剂充分渗入大鼠肠腔。 
　　1.5 分组及给药
　　将正常大鼠随机分为正常对照组与FeSO4对照组，每组10只;将造模大鼠随机分为模型对照组，Fe-SO4给药高、中、低剂量组，每组10只。FeSO4对照组大鼠，按照100 mg · kg-1·d-1    灌胃FeSO4混悬液;Fe-SO4高、中、低剂量组大鼠，分别按照300 mg·kg-1·d-1  、100 mg ·kg-1· d-1、50 mg·kg-1· d    -1灌胃FeSO4混悬液;正常对照组及模型对照组大鼠每天灌胃同体积生理盐水，各组大鼠均在造模后6 h开始给药，连续给药2周。 
　　1.6 症状观察
　　每天对各组大鼠进行称重，观察体质量变化并记录;观察大鼠粪便形状，记录大鼠发生腹泻、血便的数量。 
　　1.7 结肠黏膜组织损伤评分
　　各组大鼠给药2周后，3%戊巴比妥钠过量麻醉，腹主动脉取血2 ml，离心后置-80 ℃冰箱保存备用。将肛门以上10 cm肠段取出，沿肠系膜纵行切开，用冰生理盐水冲洗，并称量。将黏膜向上展开，观察黏膜损伤并按照Wallace和Keenan1990年的评分标准［4］进行评分:0分为无炎症和溃疡;1分为局部充血但无溃疡;2分为有溃疡但无充血;3分为有1处溃疡及炎症; 4分为有2处或2处以上溃疡及炎症;5分为溃疡延伸超过2 cm。同时取少量炎症肠组织，迅速放置液氮罐中备用。 
　　1.8 病理组织切片观察
　　取肛门以上8 cm肠段卷起，置10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，行4μm厚连续切片，HE染色观察组织学变化。 
　1.9 生化指标测定
　　血清及结肠组织MDA、SOD均按照检测试剂盒说明书进行操作。 
　　1.10 统计学处理
　　计量指标以 x-±s 表示，多组间比较行方差分析，各组间两两比较行LSD检验，采用SPSS12.0软件进行统计分析。  
　　2 结  果   
　　2.1 一般状态及大便性状的变化
　　见表1。正常组与FeSO 4对照组大鼠活动如常，反应机警，毛发有光泽，饮食正常，体质量增长较多，无腹泻及便血;制模大鼠精神萎靡，毛发无光泽，饮食减少，均出现不同程度的腹泻、便血。正常对照组与 FeSO4对照组大鼠体质量增加、腹泻及便血无显著性差异;与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量增加明显减少（ P <0.01）;FeSO4中、高剂量组大鼠体质量增加显著低于模型对照组（ P <0.05），发生腹泻、便血动物只  数明显增多。表1 各组大鼠发生腹泻数及体质量变化（略）
       
　　2.2 结肠损伤评分及生化指标改变
　　见表2。观察大鼠结肠外观及黏膜表面发现，正常对照组与FeSO4 对照组大鼠结肠黏膜无明显充血水

肿，未见糜烂及溃疡灶;模型对照组大鼠的结肠多数与  相邻脏器有轻度的粘连，结肠充血水肿，在距肛门8cm  的肠段有较大的溃疡病灶，病灶处结肠壁增厚，肠黏膜表面发生溃疡糜烂坏死，与正常对照组大鼠相比，结肠明显变短，结肠质量增加;FeSO4各剂量组大鼠结肠水肿、糜烂等炎性症状明显加重，溃疡面积增大。模型组结肠病理损伤评分、结肠组织和血清MDA水平均高于正常对照组（

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