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作者：鲁建国，王青，马庆久，宁力，房青，褚延魁，杜锡林，杨媛，林晨
 
【关键词】  肿瘤/病理学；蛋白质类/分析；硒；免疫组织化学
    【Abstract】  AIM:   To investigate the expression and significance of selenoprotein P in colon carcinoma tissues.  METHODS:  Samples were derived from 30 cases of colon carcinoma，and 30 corresponding normal colon tissues were used as controls. The expression of selenoprotein P in colon carcinoma tissues were investigated by immuohistochemical stain. RESULTS: The expression rate  of selenoprotein P in colon carcinoma(60.0%) was  significantly lower than that of their control normal tissues（80.0%, P<0.05). The expression rate of selenoprotein P in high and moderatedifferentiation  cases（86.7%） was  higher than  that  of  lowerdifferentiation  tissues（33.3%, P<0.05). The expression rate  of selenoprotein P was 58.8% in III stage cases, and  61.5% in III stage cases(P>0.05). CONCLUSION:  The  expression which of selenoprotein P is  low in colon carcinoma tissues, which is  related with differentiation levels of colon carcinoma, but not with TNM stage of tumor.
    【Keywords】 Neoplasms/pathology; proteins/analysis; selenium; immuohistochemistry
    【摘要】目的：  研究结肠癌组织中硒蛋白P的表达及其意义. 方法：  选用手术切除结肠癌组织30例，同时另取30例正常结肠组织作为对照，用免疫组化的方法观察硒蛋白P在结肠癌组织中的表达. 结果：  硒蛋白P在结肠癌组织中的阳性表达率(60.0%)低于其在正常结肠组织中的表达率（80.0%），二者相差有统计学意义(P<0.05)；硒蛋白P在高、中分化病例中表达率(86.7%)高于低分化例病例中表达率(33.3%)，二者相差有统计学意义(P<0.05)；硒蛋白P在Ⅰ~Ⅱ期病例中表达率为58.8%，Ⅲ期病例中表达率为61.5%，二者相差无统计学意义(P>0.05). 结论：  硒蛋白P在结肠癌组织中为低表达，与肿瘤的分化程度有关，与肿瘤的TNM分期无关.
    【关键词】 肿瘤/病理学；蛋白质类/分析；硒；免疫组织化学
    硒是哺乳动物必需的一种微量元素，缺硒会导致多种病理状态. 硒蛋白是微量元素硒发挥生物学功能的主要形式. 为了进一步探讨硒蛋白P在肿瘤中的作用，我们利用免疫组化技术观察该抗体在结肠癌中的表达.
    1对象和方法
    1.1对象结肠癌30例，为第四军医大学唐都医院普通外科200310/200505手术切除标本,男17例，女13例. 年龄45~79(平均61.4)岁；高分化10例，中分化5例，低分化15例；肿瘤TNM分期：I期8例，II期9例，III期13例. 另取30例原发器官正常结肠组织作为对照.
    兔抗人硒蛋白P多克隆抗体，由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室先期制备保存.  免疫组化试剂盒购自北京中杉公司.
    1.2方法① 将组织蜡块切片，常规脱腊：70℃烤片2 h，二甲苯10 min×2次. 水化： PBS洗3 min×2次.  ② 30 mL/L H2O2溶液室温处理10 min，双蒸馏水洗3 min×3次. ③ 在0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）92~98℃水浴中处理25 min修复抗原，自然冷却到室温. 缓冲液洗3min×2次. ④ 分别用正常山羊血清和卵白素室温封闭2 h. ⑤ 滴加稀释的一抗SelP多克隆抗体（1∶50），37℃孵育4 h. PBS洗3 min ×3次. ⑥ 生物素结合的羊抗兔IgG二抗和ABC复合物室温分别孵育2 h. ⑦ 滴加DAB溶液显色，注意观察颜色变化，及时终止，冲洗. ⑧ 苏木素复染，梯度乙醇脱水，封片.
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bsp; 以免疫组化试剂盒中的阳性片作阳性对照，以0.01 mol/L PBS（pH 7.4）和正常羊血清分别替代一抗和二抗作为阴性对照. 阳性染色为棕黄色，定位于细胞胞质和细胞膜. 染色阳性细胞数量评分： 0分（全片未见着色或少于5%细胞散在着色），1分（5%~25%细胞着色），2分（25%~50%细胞呈阳性），3分（50%~75%细胞染色阳性），4分（>75%细胞染色阳性）. 染色强度评分：0分（阴性），1分（弱阳性），2分（中等阳性），3分（强阳性）. 染色阳性细胞数量评分与染色强度评分之积为最终染色评分标准：0分（阴性），0~4分（弱表达），4~8分（中等表达），8~12分（强表达）.
    统计学处理: 采用SPSS10.0统计软件包，用非参数检验，两个独立样本Wilcoxon检验进行统计学分析. P<0.05认为存在显著性差异.

2结果
    2.1硒蛋白P在肿瘤及正常对照组织中的表达免疫组化染色结果见表1.表1硒蛋白P在肿瘤及正常对照组织中的表达 阳性信号为棕褐色或棕黄色，呈弥漫状或片状分布. 硒蛋白P染色主要定位于细胞胞质及胞膜中，细胞外间质也有部分染色，而细胞核无染色.在结肠癌中硒蛋白P表达与分化程度有关，尤其是伴黏液分泌者中低表达明显；细胞富于黏液成分或杯状细胞无论是正常还是肿瘤中表达均为阴性.硒蛋白P在正常对照组织中的阳性率表达高于结肠癌中的表达（图1）.
    2.2硒蛋白P在肿瘤中的表达与

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