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作者：陶思丰，陈力，许远，田华，李国刚，陈健
【关键词】  聚四氟乙烯；血管内皮生长因子类；人工血管；基因；内皮,血管/细胞学
    【Abstract】 AIM: To investigate whether vascular endothelial growth factor (VEGF) gene plasmid carried by polytetrafluoroethylene  (PTFE) vascular grafts can  be transfered to endothelial cells (ECs) and promote the growth of ECs. METHODS:  The PTFE vascular grafts carrying pCDIhVEGF121 or pCDI were soaked in normal saline. The optical density of the solution at 260 nm and the DNA concentration were measured at 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 24, 48 and 72 h, then the release curve was made. ECs were derived from human umbilical vein. ECs were seeded on the PTFE materials carrying pCDIhVEGF121 or pCDI, the number of ECs was counted and VEGF protein concentration was measured by ELISA method at 6, 24, 72 and 120 h. RESULTS: The release curve showed the plasmid was  released quickly during 0.5 4 h, then  slowly, but continuously even after 72 h. At 24, 72 and 120 h, the number and proliferation rate of ECs  on PTFE materials carrying pCDIhVEGF121 were higher than those on PTFE materials carrying pCDI (P<0.05). VEGF protein concentration of the former was higher than that of the latter at 6, 24, 72 and 120 h (P<0.01). CONCLUSION: The PTFE graft can be used as a carrier of VEGF gene plasmid and help VEGF gene transfection into ECs for promoting the growth of ECs.
    【Keywords】 polytetrafluoroethylene; vascular endothelial growth factors; blood vessel prosthesis; genes; endothelium, vascular/cytology
    【摘要】 目的： 研究聚四氟乙烯（PTFE）血管材料携载血管内皮生长因子(VEGF)基因并促进内皮细胞生长的可行性. 方法： 将pCDIhVEGF121/pCDI质粒溶液处理过的PTFE人工血管修剪成圆片，置于生理盐水中并于0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 24, 48和72 h测定溶液的吸光度，计算出溶液的DNA浓度，绘出体外释放曲线. 分离和培养人脐静脉内皮细胞，将内皮细胞种植到携带基因质粒的PTFE材料表面，在6, 24, 72和120 h检测细胞增殖情况并用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的表达量. 结果： 体外释放曲线提示在0.5~4 h的这段时间内，质粒释放较快，随后进入缓慢增长期，直至72 h仍有质粒的释放. 在24, 72和120 h时间点，VEGF质粒组PTFE材料上的内皮细胞数和增长倍率都明显高于空质粒组材料（P<0.05），在6, 24, 72和120 h时间点，VEGF质粒组培养液的VEGF蛋白水平和增长倍率也明显高于空质粒组(P<0.01）. 结论： 证实了PTFE材料携带VEGF基因转染内皮细胞并具有促进其生长的可能性.
    【关键词】 聚四氟乙烯；血管内皮生长因子类；人工血管；基因；内皮，血管/细胞学
    0引言
    聚四氟乙烯（polytetrafluoroethylene, PTFE）作为良好的人工血管材料而广泛应用于临床，但如何促进移植血管表面内皮细胞的生长而提高通畅率还是一个有待研究的课题. 近年来利用基因治疗血管性疾病已经取得了一定的疗效，并开始运用基因来改造人工血管以期获得促进内皮生长的效果. 在众多已发现的诱导血管生长的因子中，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)被认为是诱导血管内皮细胞生长作用最强、特异性最高的一种生长因子［1-2］. 我们利用PTFE自身多孔的特性来携带VEGF基因，并将血管内皮细胞种植到其表面，期望VEGF基因能够转染内皮细胞并促进其生长.

本实验就是基于上述设想，探讨了PTFE材料携带VEGF基因并转染内皮细胞的可能性.
    1材料和方法
    1.1材料PTFE人工血管，美国Bard公司产品；高效真核表达质粒pCDIhVEGF121包含编码人类VEGF121的cDNA全长序列，由北京大学人类疾病基因中心惠赠；血管内皮细胞特异性培养基MCDB，胎牛血清，胰酶，L谷氨酰胺均为美国Gibco公司产品；各种细胞培养板为美国Falcon公司产品；内皮细胞生长因子（endothelial cell growth factor, ECGF）和VEGFELISA试剂盒为美国R＆D公司产品；内皮细胞来源于人脐静脉，本实验采用1~3代细胞作为研究对象.
    1.2方法
    1.2.1PTFE人工血管携载pCDIhVEGF121将pCDIhVEGF121水溶液（1 mg/mL）与等体积的纤维连接蛋白溶液（1 mg/mL）等体积混合，将混合溶液注入一条PTFE人工血管，血管钳封闭人工血管两端，挤压人工血管，直至外壁有溶液渗出，使质粒进入人工血管壁孔隙，在超净台内自然晾干，并将其裁剪成直径为6.5 mm的圆片. 另一条人工血管用相同浓度的pCDI和纤维连接蛋白溶液同法处理.
    1.2.2PTFE人工血管携载基因后体外释放浓度测定将分别经过pCDIhVEGF121质粒溶液和pCDI质粒溶液处理后的PTFE圆片各5个分别浸入1

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